پيدا كردن پلاسميدها در كتابخانه
آزمايش روي پلاسميد
براي تهيهي كتابخانهي پلاسميدي قطعههاي 10-15 كيلوبازي از ژنوم باكتري با متلاشي كردن DNA باكتري با EcoRI به دست آمد و كلن كردن قطعات بوجود آمده درون جايگاه EcoRI وكتور پلاسميد صورت گرفت. از بين پلاسميدهاي بدست آمده ميخواهيم پلاسميد حاوي ژنهاي purB را شناسايي كنيم لذا 5 پلاسميد از كتابخانه را انتخاب و متلاشي كرده و با ژل الكتروفورز قطعات بهدست آمده را جدا مينماييم (شكل 1). در آزمايش دوم 5 پلاسميد مشابه با PCR و با استفاده از پرايمرهاي به دست آمده از تواليهاي داخلي purB مورد آناليز قرار گرفته و روي محصولات PCR الكتروفورز انجام ميشود (شكل 2). هر دو ژل با اتيديوم برمايد رنگآميزي ميگردد تا DNA قابل مشاهده شود.
الف) 3 و 4 ب) 3 و 5 ج) 1و 2- 3 و 4 د) 1 و 3 – 2 و 5 ر) همهي قطعات
2- در كدام پلاسيمد زير قسمتي از purB مكمل پرايمر purB وجود دارد؟
الف) 2 ب) 5 ج) 2 و 5 د) 1 ، 3 و 4 ر) 1، 2، 3، 4 و 5
3- براي مشخص كردن اينكه كدام پلاسميد حاوي ژن purB است، كدام يك از روشهاي زير نميتواند جانشين خوبي براي PCR باشد؟
الف) توالي يابي ب) هيبريد كردن ج) نقشهيابي هر پلاسميد با چند آنزيم محدود كننده د) DNase footprinting